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数显电动离心机2种分离的方法
发布日期:2016-09-26      浏览次数:1010
   数显电动离心机是通过一定速度的旋转产生离心力,从而使离心管中的液态试验物在离心力的作用下根据其颗粒和质量的大小产生分离沉淀,达到试验目的。微电脑控制离心转速和定时时间,转速自动稳定,定时。数显电动离心机属常规实验室用离心机,是生物、化学、医药等科研教育与生产部门的生化仪器,其zui高转速4000转/分,用于放射免疫鉴定及分离细胞的大质点等。
  数显电动离心机分离方法不一,适用场合也不尽相同。目前zui主流的离心分离方法主要是差速离心法和区带离心法,其实在数显电动离心技术制备超离心法一文中有提及两种离心方法,今天笔者对这两种方法的原理及应用介绍进行补充和完善。
  1. 差速离心法:许多具有生物活性的生物大分子和亚细胞器是不稳定的,需要低温高速离心,zui常用的是差速离心法。通过离心后倒出上清液和沉淀分开,把分离出来的上清液再增大转速离心,分离出第二部分沉淀,这样不断增大转速,逐级分离出所需要的物质。利用这种方法可以有效地分离大小上差别较大的颗粒,但不能分离大小相似的颗粒,而且所分离出来的组分往往是不均一的,杂有其他种类的颗粒。
  2.区带离心法:其中又可以分为两种:速率区带离心和等密度速率区带离心。
  1)速率区带离心法:这是将小量悬液放在一平缓的密度梯度液上,用此梯度液来稳定颗粒的沉降。由于离心,颗粒离开起始区带而移动,移动的速度是由颗粒的大小、形状和它们所受数显电动离心机的离心力来决定的。离心一段时间历,各种颖粒将按照它们的相对速度移动而各个分开,成为一系列区带。用这种方法我们可以将沉降速度差为20%或者更大的颗粒。
  2)等密度区带离心法:这是将要分离的颗粒悬液放密度梯度液上,或者实际上将颗粒溶于制作梯度的溶液中。通过离心,颗粒或者上浮或者下沉,达到与它们自己密度相同的液体处在这里它们没有重量,不管离心多长时间,它们再也不移动了。这些颗粒可成为一系列区带,每种颗粒在它自己的密度区。所以,这是一种利用颗粒浮密度的大小分离颗粒大小的方法。使用的介质通常是氯化铯(Cscl)和硫酸铯(Cs2SO4)。前者适合于DNA分离,后者适合于RNA分离。这种方法与速率区带离心法相比,它有一个主要的缺点是在离心期间,颗粒不可避免地暴露在高浓度的梯度溶液中,会引起颗粒的部分损伤,并可能出现相当于损伤颗粒的一些额外的区带。

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